МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ,
МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
(ISC)
Межгосударственный |
ГОСТ |
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ,
ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ
Иммуноферментный метод
определения остаточного содержания
метаболита фуразолидона
|
Москва Стандартинформ 2016 |
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 октября 2015 г. № 81-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по MK (ИСО 3166) 004-97 |
Код страны по MK (ИСО 3166) 004-97 |
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения |
AM |
Минэкономики Республики Армения |
Киргизия |
KG |
Кыргызстандарт |
Россия |
RU |
Росстандарт |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 января 2016 г. № 4-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33615-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.
5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
Содержание
ГОСТ 33615-2015
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ
Иммуноферментный метод определения остаточного
содержания
метаболита фуразолидона
Food products, food raw materials.
Immunoenzymatic method for determination of furazolidone metabolite
Дата введения - 2017-01-01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на мясо, мясо птицы, яйца, яичный порошок, яичный меланж, молоко, рыбу, мед и устанавливает иммуноферментный метод определения остаточного содержания метаболита фуразолидона (3-амино-2-оксазолидинона) в диапазоне измерений от 0,7 до 62,5 мкг/кг, для сухого молока - от 7 до 625 мкг/кг.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-791) Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
1) В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 2652-78 Калия бихромат технический. Технические условия
ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия
ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ ИСО 5725-6-20032) Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
2) В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 7269-79 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 19792-20011) Мед натуральный. Технические условия
1) В Российской Федерации действует ГОСТ Р 54644-2011 «Мед натуральный. Технические условия».
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу
ГОСТ 31339-2006 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 31467-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю «Национальные стандарты», составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины, определения и сокращения
3.1 В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1.1 тест-система: Набор (комплект) специально подобранных реагентов (реактивов) и составных частей, предназначенный для определения одного или нескольких конкретных веществ.
3.1.2 вспомогательный раствор: Раствор, приготовляемый заблаговременно и необходимый для приготовления других типов растворов.
3.1.3 рабочий раствор: Раствор одного или нескольких реактивов, приготовляемый непосредственно перед использованием и необходимый для выполнения процедуры анализа.
3.2 В настоящем стандарте применены следующие сокращения:
AOZ - 3-амино-2-оксазолидинон (метаболит фуразолидона);
АГ - антиген;
AT - антитела;
ИФА - иммуноферментный анализ;
ОП -оптическая плотность;
П -относительное поглощение;
ТМБ - 3,3',5,5'-тетраметилбензидин;
ФК - ферментный конъюгат.
4 Сущность метода
4.1 Иммуноферментный метод основан на измерении массовой концентрации AOZ в растворах экстрактов исследуемых проб с помощью прямого твердофазного конкурентного ИФА.
4.2 Прямой твердофазный конкурентный ИФА основан на способности маркерного метаболита AOZ и ФК в условиях конкуренции взаимодействовать со специфичными AT, нанесенными на поверхность лунок планшета.
4.3 Связавшийся с AT AOZ, меченный пероксидазой хрена, выявляют путем измерения интенсивности окрашивания продукта реакции окисления 3,3',5,5'-тетраметилбензидина (раствор № 5, см. приложение А) перекисью водорода.
Аналитический сигнал (регистрируемое значение ОП), характеризующий степень взаимодействия AT с АГ, обратно пропорционален массовой концентрации AOZ в растворе.
5 Метрологические характеристики
5.1 Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение измерений массовой концентрации (содержания) AOZ с расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата k = 2, указанной в таблице 1.
Таблица 1 - Метрологические характеристики метода
AOZ |
Диапазон |
Значение |
Показатель |
Показатель |
Предел
повторяемости |
В мясе, мясе птицы, яйцах, яичном порошке, яичном меланже, рыбе, молоке, меде |
От 0,7 до 2,0 включ. |
50 |
16 |
24 |
44 |
Св. 2,0 до 62,5 включ. |
30 |
9 |
14 |
25 |
|
В сухом молоке |
От 7 до 20 включ. |
50 |
16 |
24 |
44 |
Св. 20 до 625 включ. |
30 |
9 |
14 |
25 |
6 Требования безопасности и условия выполнения измерений
6.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.
6.2 Помещения, в которых проводится анализ и подготовка проб, должны быть оборудованы при-точно-вытяжной вентиляцией, и соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и электробезопасности по ГОСТ 12.1.019.
6.3 К выполнению измерений допускаются лица, владеющие техникой ИФА и изучившие инструкции по применению тест-систем и инструкции по эксплуатации используемых приборов.
6.4 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- температура окружающего воздуха....................от 20 °С до 30 °С;
- атмосферное давление..........................................от 84 до 106 кПа;
- напряжение в питающей электросети..................от 200 до 240 В;
- частота переменного тока......................................от 49 до 51 Гц;
- относительная влажность воздуха........................от 40 % до 80 %.
7 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы
7.1 При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, аппаратуру, материалы и посуду:
- весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с наибольшим пределом взвешивания не более 150 г и пределом допускаемой абсолютной погрешности ±0,05 г;
- весы микроаналитические с наибольшим пределом взвешивания 52 г, с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ±0,01 мг;
- рН-метр любой марки, позволяющий проводить измерения в диапазоне от 3 до 10 ед. рН с погрешностью ±0,05 ед. рН;
- фотометр вертикального типа фотометрирования с диапазоном измерений ОП от 0 до 3 в комплекте с интерференционными светофильтрами для длин волн 450 и 620 нм;
- баню водяную с терморегулятором, позволяющим поддерживать температуру от 40 °С до 100 °С, с отклонением от заданной температуры ±5 °С;
- измельчитель-гомогенизатор лабораторный;
- калькулятор любого типа с логарифмической функцией;
- микроцентрифугу любого типа с частотой вращения 7000 об/мин;
- морозильную камеру любого типа, обеспечивающую среднюю температуру в холодильной камере не выше минус 20 °С.
- роторный испаритель любого типа или устройство для испарения экстрактов, с термостатируемым нагревательным модулем с системой отдувки растворителей инертным газом;
- термостат любого типа, поддерживающий температуру (37 ± 1) °С;
- холодильник бытовой с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от 0 °С до 8 °С;
- центрифугу с бакет-ротором и адаптером для пробирок вместимостью 15 см3, частотой вращения не менее 4000 об/мин;
- шейкер переворачивающий вертикального вращения 360° в одной плоскости с адаптером для пробирок и диапазоном скорости от 20 до 100 об/мин;
- шейкер вортексного типа, с вставкой для одной пробирки и диапазоном скорости от 150 до 2500 об/мин;
- шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий поддержание температуры не менее (95 ± 5) °С;
- бумагу индикаторную универсальную, рН 0-12;
- бумагу масштабно-координатную по ГОСТ 334, марки Н-1;
- бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026;
- колбы 1-100 (1000)-2 по ГОСТ 1770;
- колбы конические Кн-1-25(50)-24/29 ТС по ГОСТ 25336;
- пипетки многоканальные переменной вместимости 0,03 - 0,3 см3, с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ±1,0 %;
- пипетки одноканальные переменной вместимости 0,005 - 0,05; 0,1 - 1,0; 0,5 - 5,0 см3 с допустимой относительной погрешностью дозирования по карбинолу и ацетонитрилу не более ±1 %;
- пробирки стеклянные типа П-1-10-0,1 ХС по ГОСТ 25336;
- пробирки стеклянные типа «Фалькон» вместимостью 50 см3 с завинчивающимися крышками;
- пробирки типа «Эппендорф» вместимостью 1,5 см3;
- цилиндры 1(2,3)-10(250, 500)-1 по ГОСТ 1770.
7.2 При выполнении измерений применяют следующие реактивы:
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709;
- калия бихромат по ГОСТ 2652;
- кислоту серную по ГОСТ 4204, концентрированную;
- кислоту соляную по ГОСТ 3118, концентрированную, плотностью 1,19 г/см3, х. ч.;
- метанол с содержанием основного вещества не менее 99 %, х. ч.;
- натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х. ч.,
- натрия фосфат додекагидрат с содержанием основного вещества не менее 98 %;
- н-гексан с содержанием основного вещества не менее 98 %, х. ч.;
- тест-систему для прямого твердофазного конкурентного ИФА в комплектации (приложение А), которая предназначена для определения AOZ;
- этилацетат с содержанием основного вещества не менее 98 %, х. ч.
8 Подготовка к выполнению измерений
8.1 Подготовка оборудования
8.1.1 При подготовке к проведению измерений лабораторную стеклянную посуду моют смесью водного раствора бихромата калия с концентрированной серной кислотой, многократно промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу.
8.1.2 Подготовку и проверку фотометра и рН-метра проводят в соответствии с руководством по эксплуатации приборов.
8.2 Приготовление растворов
8.2.1 Приготовление раствора фосфата натрия с молярной концентрацией 0,3 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 11,4 г натрия фосфата додекагидрата, растворяют в 500 см3 дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки водой.
Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 °С - не более 1 мес.
8.2.2 Приготовление раствора соляной кислоты с молярной концентрацией 1 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 8,5 см3 концентрированной соляной кислоты, доводят объем раствора дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и тщательно перемешивают.
Срок хранения раствора в вытяжном шкафу при комнатной температуре - не более 1 мес.
8.2.3 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,1 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,4 г гидроокиси натрия, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой. Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 1 мес.
8.2.4 Приготовление рабочих градуировочных растворов AOZ К1 - К5
8.2.4.1 Приготовление исходного раствора К0
В пробирку типа «Эппендорф» вносят 0,9 см3 дистиллированной воды, добавляют 0,1 см3 реактива № 1 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение 30 с.
8.2.4.2 Приготовление рабочих градуировочных растворов AOZ К1 - К5
Рабочие градуировочные растворы К1 - К5 готовят в стеклянных пробирках типа «Фалькон» согласно таблице 2.
Таблица 2 - Приготовление рабочих градуировочных растворов K1 - К5
Название и
массовая раствора AOZ |
Вносимый объем, см3 |
||||
дистиллированной воды |
исходного раствора К0 |
рабочего раствора К5 |
рабочего раствора К4 |
рабочего раствора К3 |
|
К5 (62,5 мкг/дм3) |
0,9 |
0,1 |
- |
- |
- |
К4 (12,5 мкг/дм3) |
0,8 |
- |
0,2 |
- |
- |
К3 (2,5 мкг/дм3) |
0,8 |
- |
- |
0,2 |
- |
К2 (0,5 мкг/дм3) |
0,8 |
- |
- |
- |
0,2 |
K1 (0 мкг/дм3) |
1,0 |
- |
- |
- |
- |
Пробирки закрывают крышками и перемешивают на шейкере в течение 20 с. Используют свежеприготовленные растворы.
8.2.5 Приготовление рабочего раствора буфера для промывки
В колбу вместимостью 50 см3 вносят 28 см3 дистиллированной воды, добавляют 1,47 см3 реактива № 3 (см. приложение А), перемешивают.
Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 °С - не более 1 мес.
8.2.6 Приготовление рабочего раствора реакционного буфера
В стеклянную пробирку вносят 10 см3 реактива № 4 (см. приложение А) и 0,0065 см3 реактива № 7 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение 30 с.
Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 °С - не более 1 сут.
8.2.7 Приготовление 20 % раствора метанола в рабочем растворе реакционного буфера
В колбу вместимостью 25 см3 вносят 8 см3 рабочего раствора реакционного буфера (см. 8.2.6), добавляют 2 см3 метанола, перемешивают.
Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 °С - не более 1 сут.
8.2.8 Приготовление рабочего раствора ферментного конъюгата
В стеклянную пробирку вносят 2,25 см3 реактива № 4 (см. приложение А) и 0,25 см3 реактива № 2 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение 10 с. Используют свежеприготовленный раствор.
8.3 Отбор проб
8.3.1 Отбор проб мяса -по ГОСТ 7269.
8.3.2 Отбор проб мяса птицы - по ГОСТ 31467.
8.3.3 Отбор проб молока - по ГОСТ 26809.
8.3.4 Отбор проб яиц, яичного меланжа и яичного порошка - по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт.
8.3.5 Отбор проб рыбы -по ГОСТ 31339.
8.3.6 Отбор проб меда -по ГОСТ 19792.
8.3.7 Срок хранения отобранных проб при температуре от 2 °С до 8 °С - 2 сут. При отсутствии возможности исследования проб в течение двух суток они должны быть заморожены при температуре минус 20 °С со сроком хранения не более 2 мес.
8.4 Подготовка проб
8.4.1 Мышечную ткань предварительно очищают от жира, грубой соединительной ткани и измельчают на гомогенизаторе.
8.4.2 Яйца отделяют от скорлупы и перемешивают на гомогенизаторе. Меланж, яичный порошок тщательно перемешивают.
8.4.3 При подготовке питьевого молока проводят его обезжиривание с помощью центрифугирования в течение 15 мин при 4000 об/мин. Верхний слой удаляют.
При подготовке сухого молока 1 г пробы перемешивают с 10 см3 дистиллированной воды до полного растворения. Далее проводят обезжиривание, как описано выше.
8.4.4 1,00 г гомогенизированной пробы или 1 см3обезжиренного молока помещают в стеклянные пробирки типа «Фалькон». Затем обрабатывают испытуемые пробы и градуировочные растворы, приготовленные по 8.2.4.2, как указано на рисунке 1.
Рисунок 1 - Обработка испытуемых проб и градуировочных растворов
9 Проведение иммуноферментного анализа
9.1 Общие положения
9.1.1 При проведении испытаний следует использовать реагенты и компоненты, входящие в один и тот же набор (тест-систему). Разбавление или замена реагентов из набора (тест-системы) другой серии не допускается.
9.1.2 Наборы (тест-системы) следует хранить при температуре от 2 °С до 8 °С в пределах срока хранения.
9.1.3 Окрашивание раствора субстрата № 5 (см. приложение А) является признаком его порчи и делает невозможным его применение для анализа.
9.2 Подготовка тест-системы к проведению анализа
9.2.1 Перед использованием тест-систему вынимают из холодильника и выдерживают при комнатной температуре не менее 30 мин, после чего аккуратно встряхивают каждый флакон. Реактив № 3 (см. приложение А) необходимо прогреть в термостате при температуре 37 °С до полного растворения кристаллов солей и тщательно перемешать.
9.2.2 После использования реагенты тест-системы сразу убирают в холодильник.
9.2.3 На всех стадиях необходимо избегать воздействия прямого солнечного света.
9.2.4 Для каждого реактива и раствора используют отдельные съемные наконечники пипеток переменной вместимости. Внесение растворов в лунки проводят осторожно, не касаясь наконечниками их дна и стенок.
9.2.5 Каждый исследуемый раствор экстрактов испытуемых проб (см. 8.4) и градуировочных растворов (см. 8.2.4.2) анализируют в двух повторностях.
Примечание - Далее приведены расходы реактивов на два стрипа1), что достаточно для анализа трех исследуемых проб. Для другого числа проб количество используемых стрипов и смешиваемых объемов реагентов изменяют в соответствии с количеством исследуемых проб.
1) Стрип - полоска из восьми лунок.
9.3 Проведение анализа
9.3.1 Из планшета извлекают необходимое число стрипов. Неиспользованные стрипы хранят в закрытом фольгированном полиэтиленовом пакете с зип-локом2) при температуре от 2 °С до 8 °С в течение всего срока годности тест-системы.
2) Зип-лок - замок, обеспечивающий герметизацию пакета.
9.3.2 В лунки планшета вносят по 0,05 см3 экстрактов рабочих градуировочных растворов К1 - К5 (см. 8.2.4.2) и растворов испытуемых проб.
Каждый раствор вносят в двойной повторности (лунки-дубли).
Внесение растворов проводят согласно приложению Б.
Далее в каждую лунку вносят по 0,05 см3 рабочего раствора ферментного конъюгата (см. 8.2.8). Стрипы заклеивают пленкой или закрывают крышкой, инкубируют в термостате при температуре от 2 °С до 8 °С в течение 1 ч, после чего содержимое лунок сливают.
9.3.3 В лунки планшета вносят по 0,2 см3 раствора буфера для промывки (см. 8.2.5), оставляют на 1 - 2 мин и сливают. Процедуру промывки повторяют еще три раза. Остатки жидкости интенсивно стряхивают на чистую фильтровальную бумагу.
9.3.4 В лунки планшета вносят по 0,1 см3 раствора № 5 (см. приложение А) и инкубируют в термостате при температуре 37 °С втечение 10 мин. Добавляют по 0,1 см3 раствора № 6 (см. приложение А), аккуратно перемешивают легким постукиванием по ребру планшета. Помещают планшет в вертикальный фотометр и измеряют значения ОП при длине волны 450 нм.
10 Обработка результатов измерения
10.1 По показателям ОП в лунках-дублях находят среднеарифметические значения. Разность значений ОП для них в процентах от среднего не должна превышать 10.
Связывание AT (или относительное поглощение П, %, рассчитывают по формуле
|
(1) |
где ОПп - среднее значение ОП, измеренной в лунках с экстрактами градуировочных растворов К2 - К5 (см. 8.2.4) и с растворами экстрактов испытуемых проб;
ОПк – среднее значение ОП, измеренной в лунках с нулевым стандартом (экстрактом градуировочного раствора К1 (см. 8.2.4); По значениям процентов связывания, вычисленным для градуировочных растворов с соответствующими известными значениями массовой концентрации AOZ, мкг/дм3, строят градуировочный график в полулогарифмической системе координат.
10.2 Для построения градуировочного графика используют масштабно-координатную бумагу. На ось абсцисс наносят значения логарифмов концентраций AOZ в градуировочных растворах К2 - К5 (см. 8.2.4.2). По оси ординат откладывают значения процентов связывания, рассчитанные для массовых концентраций по формуле (1). Градуировочный график строят с использованием линейной зависимости.
10.3 С помощью градуировочного графика по значению процента связывания, полученного для растворов экстрактов испытуемых проб, находят логарифмы массовой концентрации в них AOZ. С помощью калькулятора вычисляют его обратное значение (антилогарифм), соответствующее массовой концентрации AOZ в растворе экстракта.
10.4 Массовую концентрацию (содержание) AOZ в испытуемой пробе С, мкг/дм3 (мкг/кг), рассчитывают по формуле
С = с · К, |
(2) |
где с - массовая концентрация AOZ в рабочем растворе экстракта испытуемой пробы, определяемая по градуировочному графику, мкг/дм3;
К - коэффициент пересчета мкг/дм3 в мкг/кг в экстракте испытуемой пробы, учитывающий ее разведение; для сухого молока равен 10, для остальных проб - единице.
Образец записи результатов измерений приведен в приложении В. За окончательный результат принимают среднеарифметическое двух измерений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости
|
(3) |
где С1 и С2 - результаты определений массовой концентрации (содержания) AOZ, полученные в условиях повторяемости, мкг/дм3 (мкг/кг);
Сср - среднеарифметическое результатов двух определений массовой концентрации AOZ в испытуемой пробе, мкг/дм3 (мкг/кг);
rотн - предел повторяемости (%), приведенный в таблице 1.
Результаты измерений массовой концентрации (содержания) AOZ, мкг/дм3 (мкг/кг), округляют до первого знака после запятой.
10.5 Допускается использование программного обеспечения, позволяющего определять массовую концентрацию (содержание) AOZ в испытуемой пробе по средним значениям ОП, измеренным в лунках с экстрактами градуировочных растворов и испытуемых проб.
С помощью компьютерной системы обработки данных строят градуировочную зависимость оптической плотности раствора от массовой концентрации AOZ и аппроксимируют линейной функцией.
Градуировочная зависимость считается приемлемой, если рассчитанное программным обеспечением значение коэффициента корреляции г2 ³ 0,98.
За результат измерений принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости
|
(4) |
где C1, С2 - результаты параллельных определений массовой концентрации AOZ, мкг/дм3;
r - значение предела повторяемости для разных диапазонов измерения (см. таблицу 1).
Результат определения массовой концентрации (содержания) AOZ в анализируемой пробе представляют в виде
С ± 0,01 · U, |
(5) |
где С - массовая концентрация (содержание) AOZ в испытуемой пробе, мкг/дм3 (мкг/кг);
U - значение относительной расширенной неопределенности при коэффициенте охвата k = 2, % (см. таблицу 1).
11 Контроль точности результатов измерения
Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (сходимости) и воспроизводимости, проводят с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-6 (раздел 5).
Приложение А
(рекомендуемое)
Комплектация тест-системы1) «Фуразолидон - ИФА»
1) Данный комплект реагентов является рекомендуемым и приведен для удобства пользователей настоящего стандарта.
В комплектацию тест-системы входят:
Планшет 96-луночный полистироловый стрипованный для иммунологических исследований, с иммобилизованными антителами;
Пакет полиэтиленовый фольгированный с зип-локом;
Пленка полиэтиленовая самоклеящаяся для заклеивания планшетов.
Растворы:
№ 1 - AOZ - раствор с известным содержанием AOZ (6,25 мкг/см3);
№ 2 - ФК - конъюгатAOZ с пероксидазой хрена;
№ 3 - раствор фосфатного буфера для промывки (20-кратный концентрат), рН (7,0-7,4);
№ 4 - реакционный буферный раствор с добавлением бычьего сывороточного альбумина, рН (7,0-7,4), стерильный;
№ 5 - раствор субстрата на основе 3,3',5,5'-ТМБ с добавлением перекиси водорода;
№ 6 - стоп-реагент - раствор серной кислоты молярной концентрации 0,5 моль/дм-3;
№ 7 - раствор натрия ацетата молярной концентрации 3,0 моль/дм3;
№ 8 - раствор 2-нитробензальдегида в ДМСО с молярной концентрацией 0,01 моль/дм3.
Приложение
Б
(рекомендуемое)
Схема заполнения лунок планшета
Внесение реагентов следует проводить согласно следующей схеме:
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
А |
K1 |
K1 |
№ 4 |
№ 4 |
№ 12 |
№ 12 |
№ 20 |
№ 20 |
№ 28 |
№ 28 |
№ 36 |
№ 36 |
В |
К2 |
К2 |
№ 5 |
№ 5 |
№ 13 |
№ 13 |
№ 21 |
№ 21 |
№ 29 |
№ 29 |
№ 37 |
№ 37 |
С |
К3 |
К3 |
№ 6 |
№ 6 |
№ 14 |
№ 14 |
№ 22 |
№ 22 |
№ 30 |
№ 30 |
№ 38 |
№ 38 |
D |
К4 |
К4 |
№ 7 |
№ 7 |
№ 15 |
№ 15 |
№ 23 |
№ 23 |
№ 31 |
№ 31 |
№ 39 |
№ 39 |
Е |
K5 |
К5 |
№ 8 |
№ 8 |
№ 16 |
№ 16 |
№ 24 |
№ 24 |
№ 32 |
№ 32 |
№ 40 |
№ 40 |
F |
№ 1 |
№ 1 |
№ 9 |
№ 9 |
№ 17 |
№ 17 |
№ 25 |
№ 25 |
№ 33 |
№ 33 |
№ 41 |
№ 41 |
G |
№ 2 |
№ 2 |
№ 10 |
№ 10 |
№ 18 |
№ 18 |
№ 26 |
№ 26 |
№ 34 |
№ 34 |
№ 42 |
№ 42 |
Н |
№ 3 |
№ 3 |
№ 11 |
№ 11 |
№ 19 |
№ 19 |
№ 27 |
№ 27 |
№ 35 |
№ 35 |
№ 43 |
№ 43 |
Приложение
В
(рекомендуемое)
Таблица для записи результатов измерения
Таблица В.1
Маркировка варианта |
Значение ОП |
|
|
Массовая концентрация (содержание) AOZ |
||
по лункам |
среднее |
в экстракте
с, |
в
исследуемой пробе С, мкг/дм3 |
|||
K1 |
|
|
|
|
0 |
|
K1 |
|
|||||
К2 |
|
|
|
0,3 |
0,5 |
|
К2 |
|
|||||
К3 |
|
|
|
0,4 |
2,5 |
|
К3 |
|
|||||
К4 |
|
|
|
1,1 |
12,5 |
|
К4 |
|
|||||
К5 |
|
|
|
1,8 |
62,5 |
|
К5 |
|
|||||
№ 1 |
|
|
|
|
|
|
№ 1 |
|
|||||
№... |
|
|
|
|
|
|
№... |
|
|||||
№ 42 |
|
|
|
|
|
|
№ 42 |
|
|||||
№ 43 |
|
|
|
|
|
|
№ 43 |
|
|
|
|
|
|
Ключевые слова: продукты пищевые, продовольственное сырье, метаболит фуразолидона, остаточное содержание, иммуноферментный метод, прецизионность метода, тест-система, антиген, антитела, оптическая плотность, ферментный конъюгат